Assassins Creed Brotherhood ใช้ชีวิตและสูดลมหายใจเหมือน Ezio หัวหน้านักฆ่าระดับตำนานในการต่อสู้กับ Templar Order อันทรงพลัง เขาจะต้องเดินทางไปยังเมืองที่ยิ่งใหญ่ที่สุดของอิตาลีโรมศูนย์กลางแห่งอำนาจความโลภและการคอร์รัปชั่นเพื่อโจมตีหัวใจของศัตรู การเอาชนะพวกเผด็จการที่ยึดครองนั้นไม่เพียง แต่จะต้องมีความแข็งแกร่งเท่านั้น แต่ยังต้องมีความเป็นผู้นำอีกด้วยเนื่องจาก Ezio สั่งให้กลุ่มภราดรภาพทั้งหมดที่จะมาชุมนุมกันอยู่ข้างเขา เฉพาะการทำงานร่วมกันเท่านั้นที่ Assassins สามารถกำจัดศัตรูที่เป็นมนุษย์ของพวกเขาได้ และเป็นครั้งแรกที่แนะนำเลเยอร์ผู้เล่นหลายคนที่ได้รับรางวัลซึ่งช่วยให้คุณสามารถเลือกตัวละครที่หลากหลายไม่ซ้ำใครแต่ละคนมีอาวุธที่เป็นเอกลักษณ์และเทคนิคการลอบสังหารของพวกเขาเองและจับคู่ทักษะของคุณกับผู้เล่นคนอื่น ๆ จากทั่วโลก ถึงเวลาเข้าร่วมกลุ่มภราดรภาพ